Efficient and robust preparation of tyrosine phosphorylated intrinsically disordered proteins

Logo poskytovatele
Logo poskytovatele
Logo poskytovatele

Varování

Publikace nespadá pod Filozofickou fakultu, ale pod Středoevropský technologický institut. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Autoři

BRÁZDA Pavel ŠEDO Ondrej KUBÍČEK Karel ŠTEFL Richard

Rok publikování 2019
Druh Článek v odborném periodiku
Časopis / Zdroj BioTechniques
Fakulta / Pracoviště MU

Středoevropský technologický institut

Citace
www URL
Doi http://dx.doi.org/10.2144/btn-2019-0033
Klíčová slova C-terminal domain; co-expression; CTD; IDP; intrinsically disordered proteins; phosphorylation; purification; RNA polymerase II; TRANSCRIPTION TERMINATION; LARGEST SUBUNIT; CELL-CYCLE; KINASE; STRATEGIES; SEMISYNTHESIS
Přiložené soubory
Popis Intrinsically disordered proteins (IDPs) are subject to post-translational modifications. This allows the same polypeptide to undertake different interaction networks with different consequences, ranging from regulatory signalling networks to formation of membraneless organelles. We report a robust method for co-expression of modification enzyme and SUMO-tagged IDP with subsequent purification procedure allowing production of modified IDP. The robustness of our protocol is demonstrated on a challenging system, RNA polymerase II C-terminal domain (CM), that is a low-complexity repetitive region with multiple phosphorylation sites. In vitro phosphorylation approaches fail to yield multiple-site phosphorylated CTD, whereas our in vivo protocol allows to rapidly produce near homogeneous phosphorylated CTD at a low cost. These samples can be used in functional and structural studies.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.